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400-661-1162

定點甲基化修飾

技術簡介

       甲基化是表觀修飾的重要部分,DNA甲基化可以引起DNA構象、穩定性及DNA與蛋白質相互作用方式的改變,從而影響基因表達。DNA鏈中含有很多CpG結構,雙鏈DNA CpG中的胞嘧啶五位碳原子通常容易被甲基化,基因組中60~90%的CpG都被甲基化,未甲基化的CpG成簇出現在基因啟動子核心序列或者轉錄起始位點。
       DNA甲基化轉移酶可以催化CpG的甲基化反應。DNA甲基化轉移酶有兩種,Dnmt1是一種持續性甲基化轉移酶,作用于只有一條鏈甲基化的DNA雙鏈,使其完全甲基化,參與DNA復制過程中新合成鏈的甲基化修飾;Dnmt3a/Dnmt3b是一種從頭甲基化轉移酶,可以在CpG上產生新的甲基化修飾,首先半甲基化,繼而全甲基化,該甲基化轉移酶可能參與細胞生長分化的調控,在腫瘤基因甲基化中起到重要作用。
       近年來CRISPR/Cas9技術得到快速發展,在基因切割活性失活的dCas9的5’端融合一個Dnmt3a,能夠通過dCas9介導特定位點的甲基化修飾,調控相關基因的表達。

技術優勢

  • 可實現特定DNA區域的甲基化修飾;
  • 甲基化修飾效率可達80%以上;
  • 可實現高效的基因表達調控。

技術特點

適用范圍

實驗流程


產品組成

方案選擇

  修飾效率 實驗周期 優點 缺點
PB轉座酶整合方案 操作方便 不適用于轉染效率低的細胞
慢病毒感染方案 較長 能感染大部分難轉染細胞 需要包裝慢病毒,不適用于大片段敲除
瞬時轉染方案 較長 外源基因不整合 修飾效率相對較低

技術咨詢

  • 目的修飾位點基因信息;
  • 目的細胞(可選擇由派致代購);
  • 完全培養基1-2 L(派致提供DMEM及1640常規培養基)。
派致交付:按指定方案構建的細胞系及項目報告。
交付周期:8-20周,具體時間取決于靶點復雜程度及細胞生長情況。

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FAQ

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